Para ello tenemos que romper la pared celular y la membrana plasmática que libera el ADN. Vamos a realizar esta práctica usando primero un hígado y después con unos gajos de naranja
Explicaré los pasos a realizar para tener un buen resultado y los cálculos necesarios, además añadiré los materiales necesarios a usar.
Materiales;
-Hígado de ternera -Probeta
-Naranja -Embudo
-Alcohol -Papel de filtrado
-NaCL -Colador
-Detergente (Fairy) -Vasos de precipitado
-Arena -Pipeta
-Varilla de vidrio -Mortero
Cálculos
Para esta práctica sólo hemos tenido que realizar una cuenta matemática para hallar las cantidad de gramos que existen en 2M de Cloruro sódico.
- Primero debemos sacar la masa molecular del Cloruro de Sodio “NaCl”: Na(23)+Cl(36)=59 gramos
- Partiendo de 2 moles ¿Cuántos gramos?:
2 moles*59 gr/1 mol= 118 gr
- Si en 1000 ml necesitas 118 gr en 100 ml, ¿Cuántos gramos necesitamos?
100 ml*118 gr/1000 ml=11,8 gr
- Nos dirigimos a la pesa y en un vaso de precipitado echamos 11,8 gr de NaCl y le añadimos agua (25 o 50 ml)
Procedimientos de la Naranja
-Lo primero debemos tomar unos gajos de naranja para posteriormente sacar filamentos de ADN, lo colocaremos en un mortero limpio y empezaremos a machacarlos, además añadiremos arena para facilitar la separación de la membrana y así los núcleos quedan sueltos.
-Al resultado obtenido anteriormente le añadimos 50 ml de agua, cogidos con una Probeta. A continuación con un colador filtramos la mezcla del mortero en un vaso de precipitado, así conseguiremos que los restos de tejidos que no se han roto no se mezclen con los que sí.
-Lo siguiente será medir el volumen del filtrado para tratar de añadir un volumen igual de cloruro sódico 2M. Hacemos esto para conseguir que las fibras de cromatina queden libres.
-Añadimos dos o tres gotas de Fairy para es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas.
-Y también agregamos Alcohol por las paredes del vaso de precipitado en el que tenemos la mezcla, debemos hacerlo lentamente de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN. Con la varilla de vidrio, ir removiendo siempre en la misma dirección.Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de muchas fibras de ADN.
Procedimientos del Hígado
-Lo primero debemos tomar una pequeña muestra de hígado para posteriormente sacar filamentos de ADN, lo colocaremos en un mortero limpio y empezaremos a machacarlo, además añadiremos arena para facilitar la separación de la membrana y así los núcleos quedan sueltos.
-Al resultado obtenido anteriormente le añadimos 50 ml de agua, cogidos con una Probeta. A continuación con un colador filtramos la mezcla del mortero en un vaso de precipitado, así conseguiremos que los restos de tejidos que no se han roto no se mezclen con los que sí.
-Lo siguiente será medir el volumen del filtrado para tratar de añadir un volumen igual de cloruro sódico 2M. Hacemos esto para conseguir que las fibras de cromatina queden libres.
-Añadimos dos o tres gotas de Fairy para es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas.
-Y también agregamos Alcohol por las paredes del vaso de precipitado en el que tenemos la mezcla, debemos hacerlo lentamente de forma que el alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interfase, precipita el ADN. Con la varilla de vidrio, ir removiendo siempre en la misma dirección.Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de muchas fibras de ADN.
